순상(Normal-phase) 분리에서 이동상은 낮은 극성을 띱니다. 특정 상황에서는 용리액 내에 존재하는 아주 미량의 물(traces of water)조차도 분리에 영향을 미칠 수 있습니다. 이 효과는 다른 고정상보다 실리카(silica) 또는 실리카 기반(완전히 엔드캡핑되지 않은) 고정상에서 아마도 더 두드러지게 나타날 것입니다.
이 효과는 다음의 예시와 같이 유익하게 작용할 수도 있습니다.
실험 예시: Flavanone의 분리
- 배경: 키랄 화합물인 플라바논(flavanone, 화합물 1)은 2′-하이드록시칼콘(2′-hydroxychalcone, 화합물 2)으로 전환될 수 있으므로, 세 가지 분석 물질(반응 생성물 2, (S)-1, (R)-1)을 모두 분리할 수 있는 분석법이 필요합니다.
- 분석 조건: 고정상은 Chiralcel OD를 사용하고, 이동상은 헵탄(heptane) 내 10% 이소프로판올(isopropanol)로 구성됩니다.
- 물의 영향:
- 신선한 용매 사용 시: HPLC급 품질의 용시 개봉한 이소프로판올을 사용할 경우, 반응 생성물(2)과 (S)-플라바논의 피크가 우연히 동시에 용출됩니다. (하단 그래프 “dry eluent” 참조)
- 물 첨가 시: 이동상에 250 ppm 이상의 물이 첨가되면, 피크들이 잘 분리됩니다.
- 자연적인 수분 흡수: 용매 병을 수 개월 동안 실험실 대기 중에 노출시켜 사용했을 때 용리액 내 수분 함량이 이 수준에 도달해도 동일한 분리 효과가 관찰됩니다.
오래된 용리액(수분 포함)과 갓 제조한 건조한 용리액(dry eluent)을 사용했을 때의 차이를 보여줍니다.
- 상단 그래프 (eluent with ≈ 1000 ppm water): 물이 약 1000 ppm 포함된 용리액을 사용했을 때, 화합물 2, (S)-1, (R)-1 세 피크가 모두 명확하게 분리됩니다.
- 하단 그래프 (dry eluent): 건조한 용리액을 사용했을 때, 화합물 2와 (S)-1이 겹쳐서 하나의 피크로 나옵니다.
크로마토그래피 조건 (Chromatographic Conditions)
| 항목 | 내용 |
| 시료 (Sample) | (R,S)-flavanone 및 2′-hydroxychalcone |
| 컬럼 (Column) | 4.6 mm X 25 cm |
| 고정상 (Stationary phase) | Chiralcel OD, 10 um (cellulose tris (3,5-dimethylphenyl-carbamate)) |
| 이동상 (Mobile phase) | n-heptane/isopropanol 90:10 혼합액 (상단: 약 1000 ppm 물 포함, 하단: 무수 상태) |
| 온도 (Temperature) | 20°C |
| 검출기 (Detector) | UV 254 nm |
